產品描述 GDC-0449有效抑制hedgehog通路，是一種新型及特定合成的小分子抑制劑，IC50為3 nM。
靶點 Hedgehog
IC50 3 nM
體外研究 GDC-0449有效抑制hedgehog通路，是一種新型及特定合成的小分子抑制劑，IC50為3nM。GDC-0449作用于Hedgehog信號通路，阻斷Hedgehog配位體，即細胞表面受體PTCH 及SMO的活性，從而阻斷Hedgehog信號通路。在組織生長和修復方面，Hedgehog信號通路意義重大。Hedgehog通路信號的異常激活，及不受控制的細胞增殖，可能與Hedgehog配位體，即細胞表面受體PTCH 及SMO的突變有關。在體外，GDC-0449在不抑制胰臟細胞增殖的前提下阻止原代胰臟移植物的生長，這項結果最近已經應用到臨床。GDC-0449也抑制ABCG2, P-糖蛋白, 及和MDR有關聯的重要MRP1 ABC載體。GDC-0449也阻斷其他多種ABC載體。ABC載體屬于一個膜蛋白家族，它的過量表達和耐藥性有關，這也是治療癌癥的一個重大障礙。GDC-0449強抑制兩種ABC載體，ABCG2/BCRP和ABCB1/P-糖蛋白，也溫和抑制ABCC1/MRP1。在ABCG2過量表達的HEK293細胞中, GDC-0449可以提高熒光ABCG2底物BODIPY-哌唑嗪的保持力，也可用米托蒽醌再次處理這些細胞，產生抗腫瘤的ABCG2底物。實驗使Madin-Darby犬的腎臟細胞中過量表達P糖蛋白或者MRP1，GDC-0449 提高了鈣黃綠素-AM的保持力，然后載用秋水仙素處理這些細胞。另外，用米托蒽醌,托泊替康,SN-38處理的過量表達ABCG2的人類非小細胞肺癌細胞NCI-H460/par和NCIH460/MX20，用GDC-0449再次處理。GDC-0449 作用于ABCG2 和 Pgp 的IC50值分別為1.4μM和 3.0 μM。GDC-0449 改變細胞內Ca2+ 平衡，且作用于抗cisplatin的肺癌細胞， 抑制細胞生長體內研究 GDC-0449已經用于治療動物模型的成髓細胞瘤。[2] GDC-0449 抑制原代胰腺移植瘤生長，但是不抑制細胞增殖。GDC-0449按25 mg/kg 以上劑量口服給藥髓母細胞瘤Ptch(+/-)異體移植物模型，引起細胞衰退，按92 mg/kg劑量處理兩種配位體依賴的結腸直腸癌模型D5123和1040830，每天處理兩次，抑制腫瘤生長。分析Hh通路活性和 PK/PD 模型顯示GDC-0449抑制 Gli1，IC50值與GDC-0449作用于髓母細胞瘤和D5123模型的IC50值差不多(分別為0.165 μM ±11.5% 和0.267 μM ±4.83%)。[4]
臨床實驗 GDC-0449治療基底細胞瘤已經完成二期臨床試驗階段。
推薦的實驗操作
細胞試驗:
細胞系 MDCKII細胞
濃度 20 μM
處理時間 2小時
方法 MDCKII細胞按每孔3x105密度接種在24孔板中。培養液包含不同藥物，實驗組為50 μM VP,50 μM吲哚美辛,或者20 μM GDC-0449溶解在DMSO中，對照組只含有DMSO。然后加入非熒光的鈣黃綠素-AM，最終濃度達到1.0 μM。然后在37oC溫育2小時。細胞用含Ca2+,Mg2+的Hank's平衡鹽溶液buffer沖洗2次，然后震蕩1小時溶解在含0.01% Triton X-100的磷酸緩沖液中，然后放在4oC下過夜。溶解的物質然后轉移到96孔板上，鈣黃綠素引起的熒光信號用分光光度法定量。所有的實驗操作需在暗中進行，所有的讀數用平均值±SEM表示。
動物實驗:
動物模型 Ptch(+/-)異體移植物模型
配制
劑量 25 mg/kg,92 mg/kg
給藥處理 口服
溶解性 (25°C)
? DMSO 84 mg/mL
? 水 <1 mg/mL
? 乙醇 <1 mg/mL
穩定性 2年 -20°C粉狀
2周4°C溶于DMSO
6月-80°C溶于DMSO
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